Phòng nuôi cấy mô thực vật là gì? Setup (thiết lập) phòng thí nghiệm nuôi cấy thực vật 4.0

1. Phòng nuôi cấy mô thực vật là gì?

• Phòng nuôi cấy mô thực vật là phòng được thiết kế để thực hiện quá trình nuôi cấy mô thực vật. Quá trình nuôi cấy mô thực vật là quá trình duy trì và nuôi cấy các tế bào, mô hoặc cơ quan thực vật trong một điều kiện vô trùng trên một môi trường nuôi cấy giàu dinh dưỡng. Môi trường được pha sẵn chứa các thành phần dinh dưỡng cố định, đảm bảo cho sự phát triển của cây khi cấy vào.

2. Kỹ thuật nôi cấy mô tế bào thực vật

• Nuôi cấy mô tế bào thực vật hiện đại được thực hiện trong điều kiện vô trùng, không khí lọc qua HEPA, được thực hiện trong tủ cấy. Các nguồn nguyên liệu: Thực vật sống lấy từ môi trường thường bị lây nhiễm bởi các vi sinh vật, vì vậy, khâu khử trùng bề mặt của nguyên liệu ban đầu (mẫu cấy) trong dung dịch hóa chất (thường sử dụng cồn và natri hoặc canxi hypochlorite) là cần thiết. Các mẫu cấy sau đó thường được đặt trên bề mặt của môi trường nuôi cấy đặc, nhưng đôi khi cũng được đặt trực tiếp vào trong môi trường lỏng, đặc biệt là khi sử dụng dịch nuôi cấy tế bào ở giai đoạn nghỉ. Môi trường nuôi cấy lỏng và đặc thường chứa các muối vô cơ và một ít chất dinh dưỡng hữu cơ, vitamin và các hormone thực vật. Môi trường đặc được pha từ môi trường lỏng bằng cách thêm các chất tạo gel.
• Các thành phần của môi trường, đặc biệt là các hormone thực vật và nguồn Nitơ (các loại muối nitrat, ammonium hoặc amino acid) có ảnh hưởng sâu sắc đến hình thái của các mô sinh trưởng từ nguồn mẫu ban đầu. Ví dụ, sự tăng cường auxin sẽ kích thích sự phát triển rễ, trong khi sự tăng cường của cytokinin kích thích sự phát triển chồi. Sự cân bằng của cả auxin và cytokinin sẽ tạo ra mô sẹo (callus), nhưng hình thái của sản phẩm sẽ phụ thuộc vào từng loài thực vật cũng như là thành phần môi trường.
• Khi các mẫu nuôi cấy sinh trưởng, các mảnh tế bào thường được cắt và chuyển sang môi trường mới (subcultured) để có thể sinh trưởng hoặc thay đổi về hình thái của mẫu. Thao tác và kinh nghiệm của người làm nuôi cấy mô là rất quan trọng trong việc quyết định mẫu nào được nuôi cấy và mẫu nào cần loại bỏ. Các chồi nảy sinh từ một mẫu nuôi cấy, sau đó có thể được cắt ra, tạo rễ bằng auxin và tạo cây con, khi trưởng thành, có thể được chuyển vào trong chậu đất hoặc xa hơn, có thể sinh trưởng trong điều kiện nhà kính như là cây tự nhiên.

3. Setup (thiết lập) phòng thí nghiệm nuôi cấy thực vật 4.0

3.1. Phòng rửa, sấy, hấp và sản xuất nước cất

Phòng rửa dụng cụ phải có bồn rửa lớn, có đường thoát nước riêng cho axit, có kệ để các thiết bị, có nguồn cung cấp ga, nước, điện và có thể không khí nén, ống chân không.

Các thiết bị dụng cụ chủ yếu

1. Máy sản xuất nước khử ion
2. Máy cất nước 1 lần
3. Máy cất nước 2 lần
4. Nồi hấp khử trùng
5. Tủ sấy 60 – 600 ^oC(loại có dung tích lớn)
6. Đồng hồ định giờ
7. Các giá kim loại để dựng ống nghiệm khi hấp trong nồi hấp
8. Giấy nhôm hoặc hoặc hộp kim loại để tránh bị nhiễm trở lại sau khi đã khử
9. Xà phòng, axit HCl hoặc sulfuric.
10.  Máy rửa pipet, các loại chổi cọ rửa.
11. Bồn rửa dụng cụ

3.2. Phòng pha mô trường

Các thiết bị, dụng cụ chủ yếu:

1. Tủ chứa  hoá chất 
2. Cân phân tích (chính xác đến 0,0001 g)
3. Cân kỹ thuật (chính xác đến 0,01 g)
4. Máy đo pH
5. Máy khuấy từ gia nhiệt
6. Tủ lạnh 100-200L
7. Tủ lạnh sâu (-20 đến -80^oC)
8. Lò vi sóng hay bếp đun để đun nóng môi trường khi trộn với aga

3.3. Phòng cấy vô trùng

Phòng cấy vô trùng nên là một phòng nhỏ rộng từ 10-15m2, có hai lớp cửa để tránh không khí chuyển động từ bên ngoài trực tiếp đưa bụi vào, kín, sàn và tường cần được lát gạch men hoặc sơn để lau chùi và khử trùng thường xuyên. Cửa phòng cấy nên là cửa kính vì trong khi thao tác cấy rất dễ bị phụt đèn cồn do đó cần phải dễ liên lạc với bên ngoài trong lúc cần thiết. Trên tường gắn đèn UV để khử trùng phòng.

Các thiết bị, dụng cụ chủ yếu:

1. Tủ cấy vô trùng (laminar, clean Bench): tủ cấy tĩnh và tủ cấy thổi khí vô trùng. Trong tủ cấy phải có đèn trắng để dễ làm việc và có đèn UV để khử trùng trước khi làm việc
2. Quạt thông gió
3. Đèn tử ngoại treo tường 1,2m hoặc treo trần
4. Thiết bị lọc khí.
5. Giá và bàn để môi trường 
6. Bộ dụng cụ kẹp cấy, dao mổ, que cấy vòng, kim mũi nhọn, giấy lọc, bình đựng nước cất, đèn cồn (hoặc đèn gas), cốc đựng cồn 900
7. Hoá chất xử lý buồng cấy trước khi cấy: fomadehyde (formalin)40%, NH3 25%
8. Áo choàng, mũ vải, khẩu trang

3.4. Phòng nuôi mẫu cấy

Tất cả các mẫu cấy đều được nuôi trong điều kiện nhiệt độ ánh sáng, độ ẩm, độ dài chiếu sáng, độ thông khí thích hợp. Phòng nuôi có nhiệt độ 15-30oC tùy theo mẫu cấy và mục đích của thí nghiệm. Nhiệt độ phải được phân bố đều trong toàn phòng nuôi, phải có đầy đủ ánh sáng huỳnh quang và có thể điều khiển được cường độ và thời gian chiếu sáng. Phòng nuôi phải được thổi khí đồng nhất và biên độ độ ẩm được điều chỉnh từ 20-98%.

• Các giàn đèn huỳnh quang nhiều ngăn, độ chiếu sáng ở chỗ để bình nuôi cấy từ 2000-3000 lux.
• Máy điều hòa nhiệt độ
• Máy lắc nằm ngang 100-200 vòng/phút
• Các thiết bị và dụng cụ nuôi cấy tế bào đơn
• Tủ ấm.
• Phòng nuôi sáng: tường nên sơn màu trắng. Các giá đèn được lắp đèn ống để chiếu sáng. Trong phòng cần gắn các máy móc kiểm tra chính xác nhiệt độ, độ ẩm.
• Phòng nuôi tối: để nuôi mô và các xử lí đặc biệt. Phòng cần tất cả các điều kiện như phòng sáng chỉ khác là không cần lắp đèn chiếu sáng cho cây, cửa sổ cần được che kín bằng vải đen.

3.5. Phòng sinh hóa

Đây là một phần trong phòng thí nghiệm nuôi cấy mô dùng để tiến hành các phân tích sinh hóa, phân tử và di truyền.

• Tủ hút, tủ ấm
• Cân các loại
• Máy cắt tiêu bản
• Máy đo pH
• Ly tâm lạnh
• Máy điện di,
• Máy PCR, máy sắc kí, máy quang phổ
• Tủ lạnh thường, tủ lạnh âm sâu
• Lò vi sóng
• Pipet tự động các loại
• Máy soi và chụp ảnh gel
• Các tủ đựng hóa chất, tủ hút khí độc.

LƯU Ý: Các nhân tố đảm bảo thành công trong nuôi cấy mô tế bào thực vật: có 3 nhân tố chính:

• Đảm bảo điều kiện vô trùng trong phòng thí nghiệm nuôi cấy mô.
• Chọn đúng môi trường và chuẩn bị môi trường đúng cách.
• Chọn mô cấy và xử lí mô cấy thích hợp trước và sau khi cấy.

4. Nơi nào chuyên tư vấn và thiết kế phòng thí nghiệm?

Trung tâm đào tạo và phát triển Sắc ký (EDC-HCM) đủ năng lực và có bề dày kinh nghiệm cung cấp các dịch vụ tư vấn thuộc các lĩnh vực hoạt động sau:

4.1. Xây dựng hệ thống quản lý chất lượng theo chuẩn mực quốc tế:

• Hệ thống quản lý chất lượng phòng thử nghiệm và hiệu chuẩn ISO/IEC 17025:2017
• Hệ thống quản lý chất lượng phòng xét nghiệm y tế ISO 15189:2012
• Hệ thống quản lý chất lượng ISO 9001:2008
• Hệ thống quản lý môi trường TCVN ISO 14001: 2010
• Hệ thống quản lý an toàn vệ sinh thực phẩm ISO 22000:2005…

4.2. Tư vấn xây dựng phòng thí nghiệm (hóa lý, vi sinh, quan trắc môi trường..) theo tiêu chuẩn quốc tế:

• Thiết kế hạ tầng kỹ thuật Phòng thí nghiệm
• Trang bị thiết bị Phòng thí nghiệm: chủng loại, cấu hình, phụ kiện, chất chuẩn,….
• Các giải pháp, công cụ cải tiến năng suất chất lượng sản phẩm: 5S, Kaizen, TQM…

Chúng tôi hiểu rằng mọi nỗ lực về chất lượng và dịch vụ đa dạng của chúng tôi sẽ luôn góp phần vào hiệu quả hoạt động của phòng thí nghiệm của Quý khách hàng. Chúng tôi tin chắc sẽ mang đến cho khách hàng những hỗ trợ tốt nhất và hoàn thiện nhất.

Liên hệ ngay để được tư vấn nhanh chóng về:

• Chỉ tiêu hiệu chuẩn, thử nghiệm.
• Các chương trình đào tạo.
• Tư vấn và báo giá thử nghiệm thành thạo.
• Dịch vụ Hỗ trợ kỹ thuật (Thiết kế phòng thử nghiệm vi sinh, thẩm định kho lạnh, đánh giá hệ thống quản lý chất lượng,...).

Hãy cùng chúng tôi tạo nên sự khác biệt về chất lượng và uy tín cho sản phẩm của bạn.

TRUNG TÂM ĐÀO TẠO VÀ PHÁT TRIỂN SẮC KÝ (EDC-HCM)

• Địa chỉ: 54 Nguyễn Văn Kỉnh, P. Thạnh Mỹ Lợi, Tp. Thủ Đức, Tp. Hồ Chí Minh
• Hotline: (028) 2232 4268
• Email: cskh@edchcm.com